Question

【題目】剛果紅能夠與纖維素形成紅色復合物，可用其鑒定纖維素分解菌。某研究小組將濾紙埋在土壤中，30天后從濾紙上取6g土壤樣品加入30mL生理鹽水中溶解，得到了富有纖維素分解菌的菌原液，并進行如下實驗，回答下列問題：

（1）稀釋菌原液：為確定合適的稀釋倍數，小組成員取1mL菌原液進行如下圖所示的操作。若該稀釋倍數下平板上的平均菌落數為38個，則每毫升菌原液中的細菌數大約為_____________個。該數字往往比活菌的實際數值低，除了因為在涂布過程中有少數細菌粘在涂布器上以外，還可能的原因是__________________________。

（2）培養基的準備：先對培養基用_____________法滅菌處理，待培養基冷卻至50℃左右時倒平板，在培養基凝固_____________（填寫“之前”或“之后”）加入滅菌的剛果紅。從功能上來看，該培養基屬于_____________培養基。

（3）接種與觀察：在無菌條件下，用移液槍取0.1mL稀釋后的菌懸液進行圖1中_____________所示的操作，室溫放置2~3分鐘后倒置于恒溫箱中培養。培養過程中定期觀察菌落特征和透明圈的大小，圖2中d/D的值越_____________，表示該菌對纖維素分解能力越強。

Answer 1

【答案】3.8×106 平板上的一個菌落可能由2個或多個細菌連在一起形成 高壓蒸汽滅菌 之前 鑒別 甲 小

【解析】

常用的接種方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。

常用的滅菌方法：干熱滅菌法、灼燒滅菌法、高壓蒸汽滅菌法。

（1）由圖可知，菌液稀釋了10000倍，0.1ml菌液中平均菌落數為38個，故每毫升菌原液中的細菌數大約為3.8×106個。稀釋涂布平板法計數時，當2個或多個細菌連在一起觀察到的是一個菌落，故比實際結果偏低。

（2）需要用高壓蒸汽滅菌對培養基進行滅菌處理，待培養基冷卻至50℃左右時倒平板，需要在培養基凝固之前加入滅菌的剛果紅。剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，纖維素被分解后，會產生透明圈，可以根據透明圈的大小判斷纖維素分解菌的分解能力，該培養基屬于鑒別培養基。

（3）在無菌條件下，用移液槍取0.1mL稀釋后的菌懸液進行圖1中甲操作，在室溫放置2~3分鐘后倒置于恒溫箱中培養，使菌液充分被培養基吸收。纖維素分解菌的分解能力越強，圖2中d/D的值越小，即透明圈越大。