Question

【題目】（四）生物工程

圖1是科學家用轉基因（大鼠生長激素基因）方法培育“巨型小鼠”過程中的一個步驟。圖2為3種質粒和1個含目的基因的DNA片段，其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因，都可以作為標記基因。復制原點是質粒上必需的一段復制起始的序列，與重組質粒的自主復制有關。

【1】圖1表示基因工程中的________（步驟），該步驟采用的技術方法是________。

【2】據圖2，為構建重組質粒，應使用限制酶________（Pvu Ⅰ / EcoR Ⅰ）進行切割。其中，質粒A、質粒C不能作為此目的基因運載體的原因是________。

【3】在分離提純限制酶EcoR Ⅰ的過程中，能使EcoR Ⅰ沉淀的方法是________。

A. 溶菌酶等酶解細菌細胞壁

B. 超聲波、壓力等

C. 改變pH或加入硫酸銨

D. 添加穩定劑和填充劑

【4】研究人員用交聯法固定化EcoR Ⅰ，用戊二醛作為交聯劑，使酶交聯在一起，限制酶的移動，如圖3所示。但發現固定化后的EcoR Ⅰ的活性比未固定化的要低，其最可能的原因是戊二醛________。

A. 增加了酶的分子量

B. 改變了部分酶的活性部位的空間結構

C. 占據了酶的活性部位

D. 分解了部分的酶

Answer 1

【答案】

【1】重組DNA分子導入受體細胞顯微注射法

【2】Pvu I質粒A缺少標記基因；質粒C在用與目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，從而影響重組質粒的自主復制

【3】C

【4】D

【解析】基因工程四部曲為：獲取目的基因（從基因組文庫中獲取或、利用PCR技術擴增目的基因）；基因表達載體的構建（這也是基因工程的核心）；將目的基因導入受體細胞（植物、動物、微生物）；目的基因的檢測與鑒定 （DNA分子雜交技術,分子雜交技術、抗原抗體雜交）。

【1】據圖分析，圖1表示用顯微注射法將重組DNA導入受體細胞的過程。

【2】分析題圖可以發現，要想構建基因表達載體，必須使用限制酶PvuⅠ對于目的基因進行切割；質粒A中沒有標記基因，質粒C中限制酶PvuⅠ的切割部位在復制圓點內部，會破壞質粒的功能，影響重組質粒的自主復制，因此質粒A、質粒C不能作為此目的基因運載體。

【3】在分離提純限制酶EcoR Ⅰ的過程中，能使EcoR Ⅰ沉淀的方法是改變pH或加入硫酸銨，故選C。

【4】用戊二醛作為交聯劑，使酶交聯在一起，限制酶的移動，結果發現固定化后的EcoR Ⅰ的活性比未固定化的要低，可能的原因是戊二醛分解了部分的酶，故選D。