Question

【題目】檢測大腸桿菌相對數量的方法有多種，請回答下列與大腸桿菌相關的知識：

（1）急性腸胃炎是由細菌通過消化道進入人體導致的。因此檢驗飲用水中大腸桿菌含量是有效監控疾病發生的必要措施。檢驗大腸桿菌的含量時，通常將水樣通過濾膜法過濾后再進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣接種到含___________的瓊脂固體基本培養基的表面進行培養，記錄________(顏色)菌落的數量，這種計數方法稱為_____ 。

（2）已知大腸桿菌能發酵乳糖并產酸產氣，現提供足量的已滅菌乳糖蛋白胨培養液和具塞試管，應如何判斷待檢水樣中是否含有大腸桿菌?請寫出大致的實驗思路。

________________ 。

（3）杯碟法(如下圖)是在接種有試驗菌的瓊脂平板上放上玻璃或不銹鋼的無底小杯(常稱牛津杯)，向杯內滴人待測的拮抗菌發酵液，保溫培養，抗生素由小杯滲透到周圍的瓊脂中，抑制細菌生長，因此在小杯周圍會形成一個透明圈，圈的直徑決定于抗生素的濃度。人們將含有青霉素酰化酶的大腸桿菌細胞進行固定化，用于大規模地生產青霉素母核(青霉素的主體化學結構部分)，然后再對母核的側鏈進行化學修飾，可以得到青霉素。請回答：

對大腸桿菌細胞進行固定時，常采用的方法是______________，原因為__________。把同一種大腸桿菌在5種不同條件下通過液體培養基培養相同的時間之后，再在相同的條件下通過一系列的方法提取到青霉素，滴入相同體積的提取液到上圖的杯碟內，通過透明圈的大小可比較各種條件下大腸桿菌的相對值，其中大腸桿菌數量相對最高的是___號。

Answer 1

【答案】伊紅美藍 黑色 稀釋涂布平板法 通過無菌操作向試管內注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養24 h。若試管內有氣泡生成，且pH值也降低 包埋法 細胞體積大，難以被吸附或結合，且包埋之后，不容易從網格中漏出 5

【解析】

接種微生物的方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可以對微生物進行計數和統計。在鑒別大腸桿菌的時候，經常使用伊紅美藍試劑，其可以將大腸桿菌鑒別為黑色。固定細胞的常用方法為包埋法。

（1）鑒別大腸桿菌時常常使用伊紅美藍試劑；其會將大腸桿菌鑒別為黑色，因此觀察黑色菌落即可；這種計數方法為稀釋涂布平板法，其可以根據平板上生長的菌落數進行數據的統計；

（2）由于大腸桿菌能發酵乳糖并產酸產氣，可以利用其產酸產氣的特點進行鑒別，通過無菌操作向試管內注入一定量待檢水樣，再注入已滅菌的乳糖蛋白胨培養液將試管充滿，塞上塞子，混勻后置于37℃恒溫箱培養24 h。若試管內有氣泡生成，且pH值也降低，即可表明確實為大腸桿菌發酵；

（3）對細胞進行固定常用的方法為包埋法；由于細胞體積大，難以被吸附或結合，不適合使用吸附法和化學結合法，且包埋之后，細胞不容易從網格中漏出，因此常常使用包埋法；由于題干中表明這種方法會使“小杯周圍會形成一個透明圈，圈的直徑決定于抗生素的濃度”所以5的透明圈最大，表明產生的抗生素濃度最大，即大腸桿菌的相對數量最多。