Question

【題目】復合型免疫缺乏癥患者由于缺少腺苷酸脫氨酶基因（ada基因）而導致免疫功能 缺損。科學家將正常人的ada基因轉人患者的T細胞中，再將攜帶ada基因的T細胞 注入患者體內，可以改善患者的免疫功能。回答下列問題：

（1）從正常人的T細胞中獲取總RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，在cDNA 中還需要篩選才能獲得ada基因，其原因是___________。

（2）根據ada基因兩端的核苷酸序列合成___________，并通過___________技術對目的基因進行篩選和擴增。在擴增過程中首先要進行90-95℃保溫，其目的是___________。

（3）上述治療方法屬于___________（填“體內基因治療”或“體外基因治療”），將人正常的ada基因導人到患者的T細胞時，需要構建基因表達載體，其目的是___________。

Answer 1

【答案】逆轉錄 T細胞中有多種基因進行表達 引物 PCR 使DNA解旋 體外基因治療 使目的基因在受體細胞中穩定存在并遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用

【解析】

1、基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。
（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA—分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質—抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
2、基因治療的種類：體外基因治療和體內基因治療（注意兩者的區別），其中效果比較可靠的是體外基因治療。
（1）體外基因治療：先從病人體內獲得某種細胞進行培養，然后再體外完成轉移，再篩選成功轉移的細胞增植培養，最后重新輸入患者體內，如腺苷酸脫氨酶基因的轉移。
（2）體內基因治療：用基因工程的方法直接向人體組織細胞中轉移基因的方法。

（1）以RNA為模板合成DNA的過程為逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化；T細胞中有多種基因進行表達，如ada基因，因此T細胞中的總RNA逆轉錄形成的cDNA中含有ada。
（2）根據ada基因兩端的核苷酸序列合成引物，并通過PCR技術對目的基因進行篩選和擴增。在擴增過程中首先要進行90～95℃保溫，其目的是使DNA解旋。
（3）先從病人體內獲得某種細胞進行培養，然后再體外完成轉移，再篩選成功轉移的細胞增植培養，最后重新輸入患者體內，這屬于體外基因治療。構建基因表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩定存在并遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。