Question

【題目】肺細(xì)胞中的let－7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let－7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。

請(qǐng)回答：

(1)獲取let－7基因后可采用____________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，將let－7基因與載體重組，需要的兩類(lèi)酶是____________________和______________。載體上RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位稱(chēng)為__________。

(2)進(jìn)行過(guò)程②時(shí)，如出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，可用__________酶處理，以利于傳代培養(yǎng)。

(3)從細(xì)胞水平上，研究人員知道let－7基因成功表達(dá)的依據(jù)是__________________。

(4)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，let－7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖2。據(jù)圖分析，可通過(guò)______________________________方法 ，以直接檢測(cè)let－7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中____________(填“RAS mRNA”或“RAS蛋白”)含量減少引起的。

Answer 1

【答案】PCR 限制性核酸內(nèi)切酶(或限制酶) DNA連接酶 啟動(dòng)子 胰蛋白 發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制 從細(xì)胞中提取RNA進(jìn)行分子雜交 RAS蛋白

【解析】

根據(jù)題意和圖示分析可知：圖2表示let-7基因影響癌基因RAS的表達(dá)的原理，let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS-mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制。

（1）目的基因擴(kuò)增常采用PCR技術(shù)，其依據(jù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制。過(guò)程①為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程，基因表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程中需使用限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，然后用DNA連接酶形成重組DNA。啟動(dòng)子是一段有特殊堿基序列的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。故載體上RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位稱(chēng)為啟動(dòng)子。

（2）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)如出現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，可用胰蛋白酶處理形成單個(gè)細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。

（3）let－7基因成功表達(dá)的含義是形成let－7蛋白，根據(jù)“肺細(xì)胞中的let－7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌”，可知let－7基因成功表達(dá)會(huì)抑制癌細(xì)胞的增殖，故從細(xì)胞水平分析，let－7基因成功表達(dá)的依據(jù)是發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。

（4）根據(jù)圖示分析，可從細(xì)胞中提取RNA進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。let-7轉(zhuǎn)錄形成的RNA可與RASmRNA形成雙鏈，從而阻止RAS蛋白的表達(dá)過(guò)程，故肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中RAS蛋白含量減少引起的。