Question

【題目】下圖為三種質粒和一個含目的基因的片段的示意圖。復制原點是質粒能正常復制的必需組成。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環素抗性基因，lcZ為藍色顯色基因，lacZ正常表達菌落呈藍色。EcoRⅠ、PvuⅠ為相應的限制酶切割位點，括號內的數據是該切點與復制原點的距離，單位為kb(1kb=1000個堿基對)。回答下列問題：

（1）用圖中的目的基因與質粒構建基因表達載體時，應該選擇質粒________(填“質粒A”“質粒B”或者“質粒C”)，選擇的限制酶是___________。

（2）轉錄的起始部位稱為____________，是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶______________________的部位。

（3）如果選擇的質粒與目的基因重組成功，并且在受體細胞中能正常表達，則所形成的重組質粒用EcoRⅠ完全酶切，并進行電泳觀察，可出現的片段長度有_____________或____________。

（4）導入大腸桿菌后，為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，在普通瓊脂培養基中還需加入_________，形成的菌落顏色為_____________。

Answer 1

【答案】 質粒B PvuⅠ 啟動子 識別與結合 3.6kb、3.1kb 1.1kb、5.6kb 氨芐青霉素 白色

【解析】試題分析：質粒A缺少標記基因、質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制，所以質粒A、C不能作為基因工程的運載體，質粒B可以作為載體；由圖可知，獲取目的基因使用的限制酶是PvuⅠ，所以切割質粒B也用該限制酶。

（1）據試題分析可知，用圖中的目的基因與質粒構建基因表達載體時，應該選擇質粒B；由圖可知，獲取目的基因使用的限制酶是PvuⅠ，所以切割質粒B也用該限制酶。

（2）啟動子是一段有特殊結構的DNA片段，位于基因的首端，是DNA轉錄的起點；是RNA聚合酶識別與結合的部位。

（3）要將目的基因和質粒B形成重組質粒，需用PvuⅠ限制酶，目的基因和質粒B形成的重組質粒長度為2.7-0.1+（4.0-1.0）=5.6kb（質粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時形成的大片段）、0.1+1.0=1.1kb（質粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時形成的小片段）或2.7-0.1+1.0=3.6（質粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時形成的小片段）、0.1+3.0=3.1（質粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時形成的大片段）。

（4）含目的基因的重組質粒B含有的標記基因是Ap（氨芐青霉素抗性基因），所以含目的基因的大腸桿菌也含有Ap（氨芐青霉素抗性基因），因此在普通瓊脂培養基中還需加入氨芐青霉素可以篩選出來；在目的基因與質粒B構建基因表達載體時，選擇的限制酶是PvuⅠ，破壞了lacZ基因，因此形成的菌落顏色為白色。